Cultura de células animais e seu desenvolvimento tecnológico na produção de vacinas virais
A vacina é um agente imunológico automático para a prevenção de doenças infecciosas, composto por microrganismos patogênicos (como bactérias, vírus, etc.) e seus metabólitos por meio de redução artificial de vírus, inativação ou engenharia genética. De acordo com os diferentes tipos de patógenos de doenças infecciosas que previne, pode ser dividido em vacinas bacterianas e vacinas virais. Muitas vacinas virais utilizadas na população agora precisam ser preparadas através do processo de cultura do vírus, purificação, concentração, inativação ou lise. Como os virossomos são um tipo de micro-organismo parasita especializado em células hospedeiras, sua reprodução precisa ser realizada em suas células hospedeiras específicas. Portanto,
1 processo geral de cultura de células animais
A cultura de células animais refere-se ao cultivo de populações de células animais vivas in vitro. Atualmente, muitos campos de biotecnologia usarão essa tecnologia. Especialmente no campo da medicina, a cultura de células tem um papel e valor especiais. Por exemplo, muitas vacinas ou medicamentos geneticamente modificados são obtidos por meio de cultura de células no processo de pesquisa e produção. Instrumentos e equipamentos comumente usados para cultura de células animais incluem sala asséptica, bancada ultra limpa, geladeira de baixa temperatura, medidor de pH, esterilizador a vapor de pressão, incubadora eletrotérmica de temperatura constante, aparelho de cultura, incubadora de CO2, panela de banho de água de temperatura constante, microscópio invertido, centrífuga , filtro estéril, dispositivo de lavagem, placa de contagem de células e instrumento de tecnologia de célula eletrônica, etc, O equipamento de automação de cultura de células cfam da Shenyang GREAT ELITES Intelligent Equipment Co., Ltd. pode realizar a duplicação da cultura de células, e a limpeza pode atingir um nível de limpeza de classe GMP. É adequado para empresas que precisam de um grande número de células cultivadas. A cultura celular pode ser dividida em cultura celular primária e cultura celular de subcultura.
1.1 cultura de células primárias
A cultura celular primária é um processo no qual vários tecidos do corpo do animal são retirados do corpo, tratados com várias enzimas (tripsina comumente usada), agentes quelantes (EDTA comumente usado) ou métodos mecânicos, dispersos em células únicas e cultivados em um meio adequado, para que as células possam sobreviver, crescer e se reproduzir.
No entanto, também existem alguns defeitos na cultura de células primárias, como possíveis fatores exógenos, falha na verificação antecipada da padronização e grandes diferenças entre os lotes devido à influência da idade do doador e do estado de saúde. Portanto, usar células de passagem estável para cultivar esses vírus em vez de células primárias tornou-se a direção de desenvolvimento futuro.
1.2 cultura de células de subcultura
Na subcultura, quando a cultura primária é bem sucedida, com o prolongamento do tempo de cultivo e a divisão contínua das células, ocorre a inibição do contato devido ao contato entre as células, e a taxa de crescimento diminui ou até para; Por outro lado, também será prejudicial ao crescimento ou envenenamento devido à insuficiência de nutrientes e acúmulo de metabólitos. Neste momento, é necessário dividir a cultura em pequenas partes e inoculá-las em outro recipiente de cultura (frasco) para cultura. Esse processo é chamado de subcultura ou recultura. Para a cultura em monocamada, 80% de células confluentes ou recém-confluentes são o estágio de subcultura ideal. A cultura de células de subcultura na produção de vacinas refere-se ao processo de cultura de linhas celulares estáveis, retirando as linhas celulares criopreservadas designadas para produção e cultivá-las após a ressuscitação celular.