Fatores ambientais da cultura de células
Fatores ambientais da cultura de células
1. Ambiente estéril
A não toxicidade e a esterilidade são as condições primárias para a cultura de células in vitro. In vivo, o sistema de desintoxicação e o sistema imunológico das células podem resistir à invasão de microrganismos ou outras substâncias nocivas. No entanto, no processo de cultura in vitro, as células carecem da proteção do sistema imunológico do corpo e perdem a capacidade de defender os microrganismos e desintoxicar substâncias nocivas. Para garantir que as células possam crescer e se reproduzir in vitro, é necessário garantir áreas de trabalho estéreis, boa higiene pessoal, reagentes e meios de cultura estéreis e operações estéreis.
A poluição microbiana comum inclui micoplasma, bactérias e fungos. O Mycoplasma não tem toxicidade letal, pode coexistir com as células por um longo tempo e tem efeitos potenciais nas células. No entanto, é pequeno e difícil de identificar. Ele pode ser detectado por coloração vermelha de líquen ou hoechst33342. As bactérias proliferam rapidamente e podem se expandir em grande quantidade em pouco tempo e produzir toxinas para matar as células. Existem muitos tipos de fungos, que podem ser vistos a olho nu. Eles flutuam na superfície do líquido de cultura e podem ser filamentosos, tubulares ou dendríticos.
2. Temperatura adequada
Geralmente, a temperatura adequada para células de mamíferos e aves a serem cultivadas in vitro é de 37-38 ℃, e a temperatura ambiental inadequada afetará o crescimento das células. A tolerância da célula a baixa temperatura é mais forte do que a alta temperatura. Em baixa temperatura, a atividade metabólica da célula e a capacidade de divisão nuclear diminuem. Se a temperatura não for inferior a 0 ℃, o metabolismo celular é afetado, mas não há danos; Em 25 ~ 35 ℃, as células cresceram lentamente; No entanto, se for colocado a 40 ℃ por várias horas, não é propício à sobrevivência e crescimento das células, podendo até levar à morte.
3. Pressão osmótica adequada
A solução hipertônica ou a solução hipotônica pode fazer com que as células enruguem, inchem e se rompam. Portanto, a pressão osmótica é uma das condições importantes para o cultivo celular in vitro. A maioria das células cultivadas in vitro tem uma certa tolerância à pressão osmótica. Na aplicação prática, a pressão osmótica de 260-320mmol/l pode ser aplicada à maioria das células.
4. Ambiente de gás e pH
A cultura in vitro de células requer um ambiente de gás ideal, e oxigênio e dióxido de carbono são as condições necessárias para a sobrevivência celular. O oxigênio participa do ciclo do ácido tricarboxílico das células e fornece energia para a sobrevivência, metabolismo e síntese das células; O dióxido de carbono não é apenas um produto metabólico das células, mas também um componente essencial do crescimento celular, e também está relacionado à manutenção do pH do meio de cultura. A faixa de pH adequada para a maioria das células é geralmente 7,2-7,4. Na cultura aberta, 5% de dióxido de carbono foi o melhor.