Precauções para cultura de células
Precauções para cultura de células
(1) Ao cultivar uma determinada célula pela primeira vez, você deve primeiro pesquisar o nome da célula para entender as informações relevantes, incluindo o meio de cultura, soro, aditivos, tempo normal de digestão, tempo de passagem, etc. Para células específicas (como como células cultivadas primárias), é necessário consultar a literatura relevante para obter métodos de cultura mais precisos.
(2) Ao entrar na cultura célula a célula, as seguintes etapas devem ser rigorosamente seguidas:
① Certifique-se de que todas as soluções e consumíveis para operação da célula foram desinfetados e testados sem problemas. Não use soluções e consumíveis incertos. Não empreste soluções de outras pessoas, a menos que em circunstâncias especiais.
② Certifique-se de que os punhos das roupas estão enrolados ou os punhos do jaleco branco estão presos.
③ Determine a quantidade de álcool na lâmpada de álcool e reabasteça se necessário.
④ Certifique-se de que todas as soluções e consumíveis necessários estejam ao seu alcance. Para abrir a tampa do frasco com uma mão, todas as tampas dos frascos podem ser afrouxadas antes do experimento.
⑤ Tente não derramar a solução diretamente, a menos que a boca da garrafa não esteja queimada. Se o vazamento falhar e a solução grudar na boca da garrafa, limpe cuidadosamente a periferia da boca da garrafa com uma toalha de papel pulverizada com álcool 75% (não toque na boca da garrafa) e queime-a no chama.
⑥ Se os consumíveis usados não estiverem limpos durante a operação, eles devem ser substituídos a tempo.
⑦ Limpe a tempo após o experimento, mantenha a área de trabalho limpa e arrumada e, finalmente, limpe a mesa com álcool 75%.
(3) Prevenção da contaminação celular
① Os suprimentos de laboratório evitam a poluição. Os reagentes, consumíveis e equipamentos utilizados para cultura de células devem ser minuciosamente limpos e desinfetados, e a esterilização das diversas soluções deve ser criteriosa, podendo ser utilizada somente após o teste de esterilidade ser negativo. A sala de cirurgia e o restante equipamento estéril devem ser limpos, desinfetados e esterilizados regularmente.
② Evite a poluição durante a operação.
③ Roupas que são fáceis de gerar eletricidade estática ou absorver poeira devem ser substituídas por jalecos brancos antes de entrar nas celas.
④ Antes do início do experimento, é necessário garantir que não haja problemas com as luvas. Enquanto as luvas estiverem em contato com objetos fora da cabine de biossegurança, as luvas devem ser desinfetadas a tempo.
⑤ Após entrar na sala de cultura de células, feche a porta, sente-se e caminhe o mínimo possível para evitar afetar a cortina de ar da cabine de biossegurança. Limpe as mãos e tampas de garrafas com bolas de algodão com álcool 75% antes do trabalho. Verifique rigorosamente os equipamentos, soluções e células utilizadas com antecedência. Não trazer artigos contaminados ou não esterilizados para a sala estéril, muito menos usá-los casualmente, para evitar poluição em grande escala.
⑥ O funcionamento das células deve ser leve. A boca do frasco deve ser aberta na área estéril ao redor da chama, e a boca do frasco deve ser colocada ao redor da chama para simples rotação e queima. Cuidado para não deixar a chama queimar a boca da garrafa plástica.
⑦ Durante a operação experimental, a divisória da cabine de biossegurança deve ser a mais baixa possível para minimizar a conversa. Ao espirrar ou tossir, não deve ficar de frente para a área de trabalho para evitar poluição desnecessária.
⑧ A tampa do frasco deve ser colocada de cabeça para baixo longe de si mesma para evitar que a tampa do frasco seja poluída por operação incorreta.
⑨ Não passe sobre o recipiente aberto para evitar a contaminação das células causada por objetos desconhecidos caindo sobre as roupas.
⑩ Durante a operação experimental, preste atenção à substituição oportuna da pipeta Pasteur, cabeça da pipeta e pipeta, e não execute um tubo até o final. Em caso de contato com artigos impuros ou indeterminados, eles devem ser descartados diretamente. Após o experimento, deve ser limpo a tempo de manter o laboratório limpo e arrumado. Por fim, o tampo da mesa deve ser limpo com álcool 75%.
(4) Prevenir a contaminação cruzada das células
① Ao realizar uma variedade de operações de cultura de células, os instrumentos usados devem ser rigorosamente diferenciados e é melhor marcá-los para identificação. A operação é realizada em sequência e apenas uma célula é processada por vez. Quando várias células e várias operações são realizadas juntas, é provável que ocorra confusão.
② Durante a operação de troca ou passagem de líquido, a cabeça da pipeta e a pipeta anexada às células não devem tocar a boca do frasco de reagente, para evitar trazer as células para o meio de cultura e poluir outras células.
③ Uma vez que todas as células são compradas, introduzidas de outros lugares ou estabelecidas por elas mesmas, elas devem ser preservadas e congeladas no tempo. Em caso de poluição, as células podem ser ressuscitadas e continuar a ser cultivadas.